在体外细胞培养模型中隔离表达GFP,依赖于铁灭的细胞外囊泡的协议
Fumiya Ito1, Izumi Yanatori2, Katsuhiro Kato3
1Department of Pathology and Biological Responses, Nagoya University Graduate School of Medicine, 65 Tsurumai-Cho, Showa-ku, Nagoya 466-8550, Japan; Department of Cell Biology, Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD 21205, USA.
STAR protocols
|February 16, 2024
概括
研究人员发现,铁亡是一种细胞死亡形式,促进细胞外囊泡 (EVs) 的释放,称为依赖铁亡的EVs (FedEVs). 本研究详细介绍了在体外研究中分离和分析这些特定的EV.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 对于细胞间通信至关重要,运输DNA,RNA和蛋白质等生物分子.
- 新兴的研究将细胞铁调节与哺乳动物细胞中EV分泌的新机制联系起来.
研究的目的:
- 描述一个详细的协议,以隔离表达GFP的铁性依赖EVs (FedEVs).
- 通过先进的成像和流细胞计技术,使 FedEVs 的体外分析成为可能.
主要方法:
- 在哺乳动物细胞中诱导铁亡.
- 隔离表达GFP的FEDEV.
- 通过成像和流动细胞计量分析孤立的FEDEVs.
主要成果:
- 在铁灭过程中增加了EV分泌的证明.
- 成功隔离了表达GFP的依赖铁灭的EV (FedEV).
- 使用成像和流式细胞计量对孤立的FEDEV进行表征.
结论:
- 铁亡被确定为EV分泌的显著诱导剂.
- 描述的协议提供了一种可靠的方法来获取和分析用于研究目的的FedEV.
