通过实时定量PCR (qPCR) 评估基因表达分析的参考基因,用于感染Ascaris suum的小鼠的不同组织
Jorge Lucas Nascimento Souza1, Camila de Almeida Lopes2, Thais Leal-Silva2
1Laboratory of Immunobiology and Control of Parasites, Department of Parasitology, Institute of Biological Sciences, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brazil; Laboratory of Pulmonary Immunology and Mechanics, Department of Physiology and Biophysics, Institute of Biological Sciences, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brazil.
确定稳定的参考基因对于在Askaris suum感染研究中进行准确的RT-qPCR分析至关重要. 这项研究发现了特定组织的参考基因,如肝脏中的B2M和肺中的18S,提高了实验可靠性.
科学领域:
- 寄生虫学的寄生虫学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 人类虫病是由Ascaris suum引起的,是一种广泛的虫感染,影响全球数百万人.
- 鼠标模型对于研究Ascaris suum病理生理学和宿主免疫反应至关重要.
- 定量逆转录PCR (RT-qPCR) 对于基因表达分析至关重要,需要可靠的参考基因进行正常化.
研究的目的:
- 为了确定适合的参考基因RT-qPCR在阿斯卡里斯病毒感染的小鼠组织正常化.
- 评估五种潜在参考基因 (GAPDH,18s,ACTB,B2M,HPRT1) 在不同组织 (肝脏,肺,小肠和大肠) 的表达稳定性.
- 为了证明参考基因选择对基因 (CXCL9) 表达式分析的影响.
主要方法:
- 评估了阿斯卡里斯病毒感染小鼠肝脏,肺部,小肠和大肠组织中的五个候选参考基因.
- 确认了寄生虫负担,以确保幼虫迁徙阶段.
- 使用统计方法和软件分析基因表达稳定性.
- 使用已识别的参考基因,规范化基因CXCL9表达.
主要成果:
- 没有一个单一的参考基因在所有测试的组织中表现出稳定的表达.
- B2M在肝脏中最稳定,18S在肺和小肠中最稳定.
- ACTB或ACTB/GAPDH组合被证明适用于大肠.
- 与不同参考基因的正常化导致CXCL9表达的显著变化,除了大肠.
结论:
- 组织特异性参考基因选择对于在Askaris suum感染模型中准确的RT-qPCR至关重要.
- 不适当的参考基因可能导致错误的基因表达数据和结果的误解.
- 这项研究为不同组织提供了经过验证的参考基因建议,提高了Ascaris suum研究的可靠性.
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