在非侵入性收集的第一空尿液中增加和自然存在的生物标志物的度策略
Laura Téblick1, Marijana Lipovac2, F Ricardo Burdier2
1Centre for the Evaluation of Vaccination (CEV), Vaccine & Infectious Disease Institute (VAXINFECTIO), Faculty of Medicine and Health Sciences, University of Antwerp, 2610, Wilrijk-Antwerp, Belgium. laura.teblick@uantwerpen.be.
聚乙烯甘醇 (PEG) 增强了第一次空性尿液 (FVU) 样本中无细胞DNA (cfDNA) 和基因组DNA (gDNA) 的度. 低速离心切割有效地分离cfDNA,而伪病毒则始终被颗粒化,提供了优化的生物标志物恢复.
科学领域:
- 生物标志物的发现和分析.
- 基于尿液的诊断方法
- 分子生物学技术分子生物学技术.
背景情况:
- 第一次空气尿液 (FVU) 是生殖道生物标志物的非侵入性来源.
- 优化生物标志物的度,如人类乳头瘤病毒 (HPV) 伪病毒 (PsV),无细胞DNA (cfDNA) 和细胞基因组DNA (gDNA),对于诊断准确性至关重要.
- 研究沉剂的作用,如乌罗摩杜林 (UMOD) 和聚乙烯糖醇 (PEG),可以提高生物标志物的恢复.
研究的目的:
- 评估沉剂 (UMOD和PEG) 和离心速度对FVU中的HPV PsV,cfDNA和gDNA度的影响.
- 确定从FVU样本中最大限度地提高生物标志物产量的最佳协议.
- 了解内源性FVU成分与外源性药剂在生物标志物恢复中的相互作用.
主要方法:
- 从健康的女性志愿者获得的FVU样本中添加了PhHV-1DNA,HPV16等离子体DNA和HPV16PsV (EGFP记者).
- 样品经过了度协议,包括PEG沉,低速 (1000×g,5分钟) 和中速 (3000×g,1小时) 离心.
- 使用定量PCR (qPCR) 来测量DNA水平 (GAPDH,PhHV-1,HPV16,EGFP),并量化了UMOD水平.
主要成果:
- 在离心后的颗粒中,PEG显著增加了cfDNA和gDNA度,特别是对于cfDNA.
- 没有PEG的低速离心有效地去除了细胞gDNA,同时保留了超级生物中的cfDNA.
- 伪病毒一直被颗粒化,PEG对PsV (EGFP) DNA产量显示出非显著的积极趋势;在UMOD和各种DNA标之间发现了显著的相关性.
结论:
- 这项研究为FVU的生物标记物沉协议提供了新的见解.
- 这些发现突出了FVU特性和PEG作为沉剂对cfDNA,gDNA和伪病毒度的影响.
- 使用PEG和特定离心速度的优化协议可以增强从FVU中恢复关键生物标志物.
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