量化巨细胞铁性铁 (Fe2+) 含量使用高特异性的光探头在盘子阅读器中
Philipp Grubwieser1, Natascha Brigo1, Markus Seifert1,2
1Department of Internal Medicine II, Medical University of Innsbruck, Innsbruck, Austria.
Bio-protocol
|February 21, 2024
概括
这项研究引入了一种新的方法来测量感染期间巨细胞中的铁含量,使用FerroOrange光探针. 这项技术有助于了解巨细胞如何管理铁来对抗细菌感染.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 巨细胞对于天生的免疫力和铁代谢至关重要.
- 在感染期间,巨细胞改变铁代谢以限制细菌生长.
- 了解细胞铁含量变化对于天生的免疫研究至关重要.
研究的目的:
- 建立一种可靠的方法来量化感染期间巨细胞中细胞铁水平.
- 在感染和铁过载条件下研究巨细胞中的铁稳态.
主要方法:
- 开发了一个体外感染模型,使用小鼠巨细胞系J774A.1和*Salmonella enterica*血清Typhimurium.
- 使用光探测器FerroOrange和TECAN Spark微板阅读器量化细胞Fe2+水平.
- 在没有固定或放射性同位素的情况下,在活细胞中评估铁含量.
主要成果:
- 通过 FerroOrange 成功量化了巨细胞中的细胞Fe2+水平.
- 在感染期间在正常和铁过载条件下演示了一种分析巨细胞铁含量的方法.
- 该协议是简单的,可靠的,并避免了细胞应激从广泛的准备.
结论:
- FerroOrange提供了一种有效的工具,用于评估巨细胞中细胞铁水平.
- 这种方法提供了一种非侵入性和有效的方法来研究先天免疫细胞中的铁稳态.
- 该协议适用于生物安全级别2的封闭和训练有素的人员.
