使用悬浮HEK293T细胞简化腺相关病毒生产
Aditi A Kulkarni1, Austin G Seal1, Corinne Sonnet1,2
1Gene Vector Core, Advanced Technology Cores, Baylor College of Medicine, Houston, TX, USA.
Bio-protocol
|February 21, 2024
概括
这项研究提出了一个简单的,可扩展的协议,用于生产使用悬浮细胞的复合腺相关病毒 (rAAVs),以高效地实现高载体产量. 这种方法简化了基因治疗载体的制造.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 基因治疗 基因治疗
背景情况:
- 再组合腺相关病毒 (rAAVs) 对基因疗法至关重要,但可扩展的生产仍然是一个挑战.
- 附着细胞培养是常见的,但难以扩展,而悬浮细胞面临的转染效率低下.
研究的目的:
- 开发一种简单,可扩展的协议,用于使用悬浮细胞生产rAAV.
- 为了提高HEK293T悬浮细胞在无血清介质中的转染效率.
主要方法:
- 使用无血清介质适应的HEK293T悬浮细胞用于rAAV生产.
- 采用了VirusGEN转染试剂,以实现高效的基因转移.
- 使用二醇密度梯度离心净化rAAV.
主要成果:
- 在两周内实现了从转染到质量分析的rAAV生产.
- 获得的高矢量产量 (每90毫升1-1.5x1013vg) 与附着细胞协议相比较.
- 在悬浮细胞中证明了高效的转化,克服了关键的生产瓶.
结论:
- 开发的协议提供了一种可扩展和高效的方法,用于使用悬浮细胞生产rAAV.
- 这种方法简化了基因治疗应用的制造过程.
- 该协议可以在更短的时间内实现高产量的rAAV生产.
