转基因表达中断在重组修改的疫苗病毒安卡拉载体中改善了基因稳定性和跨多个通道的持续转基因维护
Patrick Neckermann1, Madlen Mohr1, Martina Billmeier1
1Institute of Medical Microbiology and Hygiene, Molecular Microbiology (Virology), University of Regensburg, Regensburg, Germany.
Frontiers in immunology
|February 21, 2024
概括
改造的鸟类细胞抑制了转基因表达,增强了修饰的疫苗病毒安卡拉 (MVA) 疫苗的稳定性. 这克服了MVA制造过程中的遗传不稳定性,使得基于MVA的有效疫苗的可扩展生产成为可能.
科学领域:
- 疫苗学 疫苗学 疫苗学
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 修改的疫苗病毒安卡拉 (MVA) 是一个有前途的疫苗载体,但可以遭受遗传不稳定性与某些转基因.
- 这种不稳定性损害了转基因表达,并给大规模的MVA疫苗制造带来了挑战.
- 转基因介导的负选择阻碍了稳定的重组MVA (rMVA) 疫苗的开发.
研究的目的:
- 开发一种方法来防止rMVA中转基因介导的负选择.
- 设计一种细胞系,在rMVA生成和放大过程中抑制转基因表达.
- 为了提高rMVA疫苗的稳定性和制造可扩展性.
主要方法:
- 设计了AGE1.CR pIX鸟类细胞系 (CR pIX PRO抑制细胞),以构成性地表达四环素抑制剂和shRNA.
- 针对工程细胞通过poxviral促进剂和转基因mRNA抑制转基因表达.
- 产生了两个表达MfPV3 E1E2E6E7多蛋白的rMVA,集成到DelIII或TK位点.
主要成果:
- 当转基因表达被抑制时,CR pIX PRO抑制细胞使rMVA生成具有增强的复制,更高的标位和野生型MVA形态.
- 在父母CR pIX细胞上传递的rMVA迅速失去转基因表达,并积累了突变或删除.
- 抑制CR pIX PRO的细胞保持了高达10个通道的强大的转基因表达,TK位点集成显示出更大的rMVA稳定性.
结论:
- 在CR pIX PRO抑制细胞中持续的转基因表达敲击降低促进了rMVA的产生和传播.
- 这种方法改善了rMVA疫苗的大规模制造,特别是那些具有阻碍病毒复制的转基因的疫苗.
- 工程抑制细胞系在克服MVA疫苗开发中的遗传不稳定性方面发挥了重要作用.
