利用滴滴数字聚合酶连锁反应在动物血和组织中通过茎环逆转录量化siRNA
Megan K Turski1, Matthew E Albertolle1
1Global Drug Metabolism. Pharmacokinetics & Modeling, Takeda Development Center Americas, San Diego, CA, USA.
Bioanalysis
|February 21, 2024
概括
一种新的滴滴数字PCR方法提供了一种高度灵敏的方法来量化生物样本中的小干扰RNA (siRNA). 这种测试支持开发新型寡核酸治疗药物.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
背景情况:
- 小干扰RNA (siRNA) 疗法已经获得了显著的引力,美国FDA自2018年以来的多次批准证明了这一点.
- 临床开发管道显示越来越多的基于寡核酸的候选药物.
- 准确的生物分析方法对于评估siRNA药理动力学,药理动力学和毒理学在药物开发过程中至关重要.
研究的目的:
- 开发和资格一个敏感的定量测试测量siRNA在生物矩阵.
- 建立一个强大的平台,支持siRNA药物发现和开发.
- 为现有分析方法提供一种替代方案,具有增强的性能特征.
主要方法:
- 开发一种干环逆转录滴滴数字PCR (RT-ddPCR) 试验.
- 在小鼠血和肝部提取物中定量siRNA.
- 按照已确定的生物分析指南进行方法合格.
主要成果:
- 开发的RT-ddPCR试验表现出高灵敏度和广泛的动态范围 (390到400,000副本/反应).
- 该试验证明在血和肝脏组织样本中测量siRNA的有效性.
- 与其他平台相比,该方法对矩阵效应的敏感性较低.
结论:
- 新型RT-ddPCR试验是生物分析中siRNA量化的一种优越替代方法.
- 该试验的灵敏度和动态范围使其适用于临床前和临床应用.
- 这种方法已经准备好用于FDA的新药 (IND) 启用研究.
