基于稳定同位素标记的两步衍生策略用于分析类

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 对特定区域的蛋白质酸化分析具有挑战性.
• 现有的化学衍生方法用于类的识别有局限性,包括不完整的转换和高试剂成本.
• 精确识别和量化酸对于了解细胞过程至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种具有成本效益的两步化学衍生方法,用于准确地确定特定地点的类.
• 提高使用液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 进行聚分析的灵敏度和可靠性.
• 为了证明该方法在识别人体唾液等复杂生物样本中的内源性类的实用性.

主要方法:

• 使用甲基胺和二甲基胺 (包括像二甲基胺-d6这样的稳定同位素) 的两步化学衍生物被采用.
• 甲基胺中和了碳基组,以减少非特异性吸附.
• 甲基胺促进了酸化位点的稳定同位素标记,产生了独特的记者离子 (m/z 58.07 和 64.10),用于识别和定量.
• 液体染色学-双重质谱学 (LC-MS/MS) 和并行反应监测 (PRM) 用于分析.
• 蛋白质组软件被用来选记者离子用于光的识别.

主要成果:

• 衍生法显著增强了化和产物离子形成的类.
• 用二甲基胺-d0和二甲基胺-d6标记的稳定同位素使得产生特定的记者离子成为可能.
• 该方法允许根据它们的酸化位区分异构型.
• 使用并行反应监测 (PRM),在一个小体积 (10μL) 的人唾液中可靠地鉴定出29种内源性.
• 与现有技术相比,该方法显示出高效率,成本效益和更高的灵敏度.

结论:

• 开发的两步化学衍生策略对于特定站点的类的识别非常有效.
• 这种方法提供了更好的灵敏度,成本效益,以及全面的产品离子覆盖面对蛋白质组学.
• 在人类唾液中成功识别了内源性脂蛋白,这突显了其对大规模脂蛋白学研究的潜力.
• 该战略通过提供可靠的工具来准确分析蛋白和蛋白质,从而使该领域取得了进展.