通过使用Cas9和AAV替换全长CFTRcDNA引起的不良基因组和监管变化的调查
Sriram Vaidyanathan1,2, Jenny L Kerschner3, Alekh Paranjapye3
1Center for Gene Therapy, Abigail Wexner Research Institute at Nationwide Children's Hospital, Columbus, OH 43205, USA.
Molecular therapy. Nucleic acids
|February 22, 2024
概括
一种针对囊性纤维化 (CF) 的通用基因编辑策略通过恢复CFTR功能显示出有希望. 安全性评估发现了轻微的基因组改变,这表明大多数CF患者的治疗可能是可行的.
科学领域:
- 基因治疗是一种基因疗法.
- 基因组学就是基因组学.
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 囊性纤维化 (CF) 影响超过99%的患者由于各种CFTR突变.
- 一种通用基因编辑策略旨在通过将CFTRcDNA和tCD19标签插入CFTR位点来恢复CFTR功能.
- 之前的研究表明,在编辑的气道基底干细胞中,CFTR功能恢复到非CF水平.
研究的目的:
- 调查通用CFTR基因编辑策略的安全性.
- 评估CFTRcDNA插入后的基因组和监管变化.
- 评估对细胞再生和基因表达的影响.
主要方法:
- 使用CAST-seq来量化遗传重组.
- ATAC-seq用于表征CFTR位点的开放色素样式.
- scRNA-seq用于评估编辑细胞中的再生潜力和基因表达.
主要成果:
- 在CAST-seq中,在1%的等位基中,在非致癌部位的~0.01%的等位基中发现了转位,并且在1%的等位基中发现了大内置.
- ATAC-seq显示,除了插入部位外,分化呼吸道上皮细胞的开放色素配置没有显著变化.
- scRNA-seq显示,编辑后的干细胞产生了正常的气道细胞类型,基因表达变化最小.
结论:
- 全面的CFTR基因编辑策略显示了有利的安全性,但基因组发生了轻微的不良变化.
- 这种方法有可能治疗绝大多数患有囊性纤维化的人.
- 需要进一步的研究,以充分阐明这种基因编辑策略的长期安全性和有效性.
