新的BRET组合用于检测拉巴素诱导的蛋白质二分化,使用菌Neonothopanus的光酶
Aaiyas Mujawar1,2, Shalini Dimri1,2, Ksenia A Palkina3,4
1Advanced Center for Treatment Research and Education in Cancer (ACTREC), Sector-22, Kharghar, Navi Mumbai 410210, India.
Heliyon
|February 22, 2024
概括
研究人员开发了一种新的真菌生物发光共振能量转移 (BRET) 系统,用于非侵入性成像. 这种新工具可以在哺乳动物细胞中进行增强的蛋白相互作用研究和多重评估.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 生物光子学 生物光子学
背景情况:
- 生物发光共振能量转移 (BRET) 对于蛋白质与蛋白质相互作用的非侵入性体内成像至关重要.
- 现有的BRET系统存在局限性,需要开发新的直角工具.
研究的目的:
- 为BRET应用引入一种来自Neonothopanus nambi真菌的新型,可遗传编码的生物发光系统.
- 通过使用与现有系统直角的真菌 luciferase 来建立一个新的 BRET 供体.
- 开发一种拉巴胺生物传感器,用于监测mTOR通路.
主要方法:
- 发现和描述一种来自Neonothopanus nambi.的新型光酶.
- 使用真菌光酶和红色光蛋白 (tdTomato) 构建BRET捐赠者-接受者对.
- 使用FRB/FKBP12二分化设计和验证一个mTOR路径生物传感器.
主要成果:
- 菌 luciferase 作为一个有效的 BRET 捐赠者,tdTomato 显示了高的 BRET 效率.
- 成功设计了一种针对mTOR通路的特定且有效的拉巴素生物传感器.
- 在哺乳动物细胞培养中证明有效性,为复合BRET铺平了道路.
结论:
- 这种基于真菌 luciferase 的新型 BRET 系统提供了一个直角成像工具.
- 该系统可对蛋白相互作用和通路活性进行敏感监测.
- 开发的BRET方法对未来的多重生物成像研究具有前景.
