构建人类单链可变片段 (scFv) 库和下游查通过菌体显示器的详细协议
Ziyi Liu1,2, Dokyun Kim1,2, Seokmin Kang1,2
1Cancer Biology Department, Infection Biology Program, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, Cleveland, OH 44195, USA.
Methods and protocols
|February 23, 2024
概括
研究人员开发了一种方法,可以从人类患者中创建一个大型单链可变片段 (scFv) 库. 该库使用菌体显示屏进行选,产生用于研究和临床使用的高亲和度抗体.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 单克隆抗体 (mAbs) 由于其特异性,在研究和医学中至关重要.
- 菌体显示技术可以在体外查抗体以检测高抗原亲和力.
- 与传统抗体相比,单链可变片段 (scFv) 具有较高的结合亲和力和较小的尺寸.
研究的目的:
- 详细说明构建一个多样化的人类 scFv phagemid 库的程序.
- 使用菌体显示亲和性选择概述一个高通量查协议.
- 为研究和临床应用确定高 afinity scFvs提供一个有价值的资源.
主要方法:
- 使用 348 种原料组合构建 scFv 体库,以确保广泛覆盖人类抗体库并最大限度地减少偏差.
- 一个scFv库的生成超过1 × 10^8的多样性.
- 使用菌体显示和酶相关免疫吸收试验 (ELISA) 对超过1200个scFv候选者的高通量查.
主要成果:
- 成功地生成了一个高度多样化的人类scFv phagemid库.
- 建立一个强大的菌体显示查方法.
- 识别具有对目标抗原高 afinity 的 scFv 候选体.
结论:
- 开发的协议提供了一个全面的方法来创建和选scFv库.
- 预计这种方法将加速新型治疗和诊断抗体的发现.
- 生成的图书馆是推动基于抗体的研究和临床应用的宝贵资源.
