为CRISPR淘汰人类iPSC衍生的巨细胞的优化协议

科学领域:

• 干细胞生物学 干细胞生物学
• 基因编辑 基因编辑
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 巨细胞在免疫反应,炎症,神经退行性疾病和癌症中发挥着关键作用.
• 对人类诱导多能干细胞 (iPSC) 衍生的巨细胞进行有效的基因操纵对于研究这些作用至关重要.
• 现有的iPSC衍生巨细胞基因编辑协议可能是低效或复杂的.

研究的目的:

• 详细介绍CRISPR-Cas9基因组编辑技术在iPSC衍生的巨细胞中透视传递的详细方案.
• 建立一种有效的方法,在iPSC衍生的巨细胞中产生基因淘汰,用于功能研究.
• 促进研究巨细胞在各种疾病过程中的参与.

主要方法:

• 与VPX病毒样颗粒 (VPX-VLPs) 共同化IPSC衍生的巨细胞,以传递lentiviral.
• 聚烯和胺杀伤曲线的生产,以优化转导效率.
• 使用西式涂抹的VPX病毒生产和定位.
• 对iPSC巨前体的lentiviral转导和随后的基于CRISPR-Cas9的淘汰.

主要成果:

• 通过使用VPX-VLP联合化方法,成功地将CRISPR-Cas9传递给iPSC衍生的巨细胞.
• 该协议包括优化转导和执行基因组编辑的详细步骤.
• 基于CRISPR-Cas9的淘汰在iPSC衍生的巨细胞中已经证明了效率.

结论:

• 该协议提供了一种有效和可复制的方法,用于iPSC衍生巨细胞的基因组编辑.
• 开发的技术可以在各种生理和病理上下文中对巨细胞功能进行可靠的调查.
• 通过对巨细胞进行精确的基因操纵,促进了免疫学,神经生物学和瘤学的先进研究.