在小鼠大脑中的内源性表皮质标记GPR4的表达

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 分子生物学分子生物学
• 身体生理学 身体生理学

背景情况:

• GPR4是一种质子感应的G蛋白合受体,参与了重要的生理过程.
• 之前的GPR4表达研究依赖于间接方法,在小鼠大脑中缺乏直接的蛋白质可视化.
• 了解GPR4定位是阐明其在中枢神经系统功能,特别是CO2/H+调制中的作用的关键.

研究的目的:

• 为了生成GPR4-HA敲入小鼠模型,直接可视化中枢神经系统中的GPR4蛋白表达.
• 为了精确地绘制GPR4蛋白在不同大脑区域内的分布图.
• 为了将GPR4蛋白位与其已知的或可疑的生理功能相关联.

主要方法:

• 采用CRISPR/Cas9敲门技术,将内源GPR4位点标记为血凝素 (HA) 表位.
• 使用特定的抗HA抗体进行免疫组织化学试验,对小鼠的大脑组织进行.
• 使用GPR4 mRNA检测来补充蛋白质表达数据.

主要成果:

• 在特定的大脑区域检测到GPR4蛋白质,包括逆形核 (RTN),拉菲核,中介性habenula,侧面隔膜和thalamic核.
• 在不同的神经元类型 (刺激性,抑制性,氨基性) 中观察到GPR4表达,不受神经化学特征的限制.
• 虽然GPR4mRNA存在于大脑血管内皮中,但这些细胞中缺乏蛋白质免疫活性.

结论:

• 鼠标GPR4-HA模型首次使鼠标大脑中的GPR4蛋白直接可视化.
• 在RTN中确定了GPR4蛋白的定位,支持其在CO2调节呼吸中的作用.
• 这项研究为研究GPR4在各种CO2/H+调节的大脑过程中的功能提供了至关重要的资源.