在斑马鱼胚胎中比较机器人和手动注射方法,以使用CRISPR-RfxCas13d进行高通量RNA沉默
Joaquin Abugattas-Nuñez Del Prado1,2, Yi Ding3, Jan de Sonneville3
1Institute of Biology Leiden, Animal Science & Health, Leiden University, Einsteinweg 55, Leiden, 2333CC, The Netherlands.
BioTechniques
|February 29, 2024
概括
自动化机器人和手动注射在斑马鱼胚胎中的CRISPR基因编辑方面表现出类似的效率. 向RNA的CRISPR (CasRx) 和向DNA的CRISPR (Cas9) 系统有效地击败了没有尾巴的基因.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 发展生物学 发展生物学
背景情况:
- 克里斯普尔基因编辑系统为基因操纵提供了强大的工具.
- 克里斯普尔-RfxCas13d (CasRx) 可实现RNA向,补充了向DNA的Cas9.
- 有效的传递方法对于CRISPR在斑马鱼等模型生物中的应用至关重要.
研究的目的:
- 为了比较CRISPR系统的自动化机器人与手动注射方法的效率.
- 评估CRISPR-RfxCas13d (CasRx) 对mRNA敲除和Cas9对DNA向的疗效.
- 评估不同交付方法和CRISPR系统对斑马鱼胚胎发育的影响.
主要方法:
- 斑马鱼胚胎注射了CRISPR-RfxCas13d (CasRx) 或Cas9系统,这些系统针对无尾 (TBXTA) 基因.
- 用自动机器人和手动微注射技术进行分娩.
- 评估了胚胎表型和死亡率,以评估系统效率和输送方法的影响.
主要成果:
- Cas9和CasRx系统都成功诱导了TBXTA基因的功能丧失表型.
- 与Cas9 mRNA相比,Cas9蛋白导致严重表型的百分比更高.
- 无论是以蛋白质或mRNA形式输送,CasRx的效率都相当,两种注射方法在表型和死亡率方面都产生了相似的结果.
结论:
- 向RNA的CRISPR效应器,如CasRx,显示出精确基因敲击的前景.
- 自动微注射是可行的,高通量替代手动注射的CRISPR应用程序.
- 该研究验证了Cas9和CasRx系统的使用以及斑马鱼基因编辑的自动注射.
