微生物转胺酶齐摩根的蛋白工程:为生物结合应用实现基质依赖激活
Ryutaro Ariyoshi1, Takashi Matsuzaki1, Ryo Sato1
1Department of Applied Chemistry, Graduate School of Engineering, Kyushu University, 744 Motooka, Fukuoka 819-0395, Japan.
Bioconjugate chemistry
|February 29, 2024
概括
微生物转胺酶 (MTG) 的工程活跃细胞原体被制造而没有裂,从而实现直接交叉链接活动. 突变突变揭示了生物结合应用的酶设计的洞察力.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 来自Streptomyces mobaraensis的微生物转质氨酶 (MTG) 是交叉链接分子的生物催化剂.
- 活跃的MTG需要裂来进行适当的折叠和活动.
- 这种裂变是重组MTG生产和应用的限制.
研究的目的:
- 在不需要蛋白质分解裂变的情况下,在大肠杆菌中表达的活性MTG酶原体 (EzMTG) 进行工程.
- 调查胺残留物在MTG生殖基折叠和活性中的作用.
- 探索EzMTG作为开发新型生物催化剂的支架.
主要方法:
- 在MTG中K10和Y12的和性突变基因的和性突变基因.
- 在大肠杆菌细胞溶液中表达工程MTG细胞原体.
- 对交联活性和基质特异反应性的测定.
- 对对MTG活性部位的propeptide结合亲和力的定量分析.
主要成果:
- 产生了几种活跃的MTGz突变 (EzMTG),其中K10D/Y12G的活性与成熟的MTG.
- 观察到一些突变的低表达水平,可能是由于伴侣活动或毒性减少.
- 这种K10R/Y12A突变体表现出特定的基质依赖反应性.
- 鉴定出了的结合亲和力和催化活性之间的反向相关性.
结论:
- 工程化活跃的MTG酶原体可以在没有裂的情况下生产,提供简化的生物催化剂.
- 蛋白工程为设计具有量身定制性能的MTG基生物催化剂提供了一种策略.
- 这项工作为生物结合的EzMTG突变体的高通量选开辟了道路.
