从Plasmodium falciparum中表达和净化活性石基酸脱酶
Bruno G Dalla Vecchia Morales1,2,3, Joseph Albert M Evaristo1, George A R DE Oliveira1,4
1Oswaldo Cruz Foundation Rondônia (FIOCRUZ/RO), Laboratory of Bioinformatics and Medicinal Chemistry, BR 364, km 9,5, Centro, 76801-059 Porto Velho, RO, Brazil.
Anais da Academia Brasileira de Ciencias
|February 29, 2024
概括
研究人员开发了第一个表达E. coli中活跃的Plasmodium falciparum shikimate dehydrogenase (PfSDH) 的方法. 这一突破有助于发现针对疟疾寄生虫的新型抗疟疾药物.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 寄生虫学的寄生虫学
背景情况:
- 疟原虫 (Plasmodium falciparum) 引起严重的疟疾,抗药性增加威胁到目前的治疗方法.
- 识别必要的寄生虫蛋白对于开发新型抗疟疾疗法至关重要.
- 石基酸脱酶 (SDH) 是一种潜在的药物点,因为它在产生必需的芳香氨基酸中的作用.
研究的目的:
- 建立第一个用于活性Plasmodium falciparumshikimate脱酶 (PfSDH) 异质表达的协议.
- 为了优化PfSDH在大肠杆菌中的表达条件.
- 确认复合PfSDH的可溶性,纯度和酶活性.
主要方法:
- 优化的PfSDH核酸序列被克隆到pET28a+PfSDH载体中,以便在大肠杆菌BL21中表达.
- 表达条件 (IPTG度,温度,时间) 被优化.
- 西部Blot被用于表达的验证,其次是IMAC净化.
- 酶活性通过NADPH氧化通过光谱测量进行了测试.
主要成果:
- 最佳的PfSDH表达是在0.1mM IPTG下在37°C和200rpm下48小时内实现的.
- 纯化复合PfSDH被发现是可溶和纯的.
- 证实了PfSDH的生理催化活性.
结论:
- 这项研究提出了第一个成功的协议,用于表达可溶和活性的Plasmodium falciparum shikimate dehydrogenase.
- 已确定的方法为进一步对PfSDH的结构和功能研究提供了基础.
- 这项工作有助于探索PfSDH作为新抗疟疾药物开发的潜在目标.


