使用液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 共同刺激途径竞争性测试开发
Abeer K Malkawi1, Leanne Ohlund1, Anas M Abdel Rahman2
1Department of Chemistry, Université du Québec à Montréal, Montreal, QC H3C 3P8, Canada.
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
|February 29, 2024
概括
一种新的LC-MS/MS方法准确量化了对T细胞激活至关重要的可溶性辅助刺激蛋白. 这种测定有助于了解自身免疫性疾病,并通过测量途径抑制来开发向疗法.
科学领域:
- 免疫学和自身免疫力
- 分析化学和质谱学.
背景情况:
- T细胞是自身免疫性疾病发展的核心.
- CD28-B7共刺激途径对T细胞激活至关重要,也是自身免疫疗法的标.
- 准确量化可溶性辅助刺激分子是研究和药物开发所需的.
研究的目的:
- 开发和验证一种精确的液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于量化四种可溶性辅助刺激蛋白.
- 使用开发的方法,为CD28-B7共刺激途径建立竞争性测定.
- 评估该试验在针对自身免疫性疾病的药物发现中的有用性.
主要方法:
- 开发一种使用多重反应监测 (MRM) 的液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于量化可溶性CD80,CD86,CTLA-4和CD28.
- 根据美国FDA指南验证LC-MS/MS方法.
- 使用CTLA4-Ig (AbataceptTM) 建立了CD28-B7通路的竞争性检测方法.
主要成果:
- 通过LC-MS/MS方法,所有四种分析品的下限量化值 (LOQ) 大约为0.5μM,量化值高达20μM (R2>0.998).
- 开发的方法已成功应用,为CD28-B7通路建立了竞争性试验.
- 通过AbataceptTM,测试确定了可溶性CD80 (sCD80) 的IC50值为2.99μM,可溶性CD86 (sCD86) 的IC50值为159.8μM.
结论:
- 一种经过验证的LC-MS/MS方法提供了可溶性辅助刺激蛋白的准确和精确量化.
- 开发的基于MRM的竞争性试验是研究自身免疫中CD28-B7通路的宝贵工具.
- 这种测试可以通过识别新型向抑制剂来推进自身免疫治疗药物发现.
