通过在不同细胞基质中通过一步实时PCR对奇孔古尼亚病毒,寨卡病毒和登革热病毒进行定量检测

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学
• 公共卫生诊断 公共卫生诊断

背景情况:

• 奇孔古尼亚病毒 (CHIKV),寨卡病毒 (ZIKV) 和登革热病毒 (DENV) 在全球范围内造成重大流行病.
• 类似的症状和共同循环使诊断复杂化.
• 现有的实时RT-qPCR测定通常是昂贵的,并且依赖于试剂,限制了可访问性.

研究的目的:

• 为CHIKV,ZIKV和DENV开发和验证一个具有成本效益的,定量的一步RT-qPCR试验.
• 为了确保在各种细胞基质中具有高的特异性,可复制性和灵敏性.

主要方法:

• 设计了一种基于绿色染料的DNA间隙RT-qPCR试验,针对特定的病毒基因 (CHIKV的nsP1,ZIKV和DENV的NS5).
• 通过化曲线分析评估了特异性,证实没有交叉反应.
• 在多个细胞系中确定灵敏度,反应效率和可重复性 (Vero,BHK-21,C6/36,LULO,Aedes).

主要成果:

• 实现高特异性,没有交叉反应或非特异性放大.
• 证明了高灵敏度,检测的限制是每个病毒一个RNA副本.
• 标准曲线显示出卓越的效率 (~100%),高相关性 (R2 ~0.97) 和低变化 (CV 0.021.43).

结论:

• 开发的基于绿色染料的DNA间隙RT-qPCR试验具有高度的特异性,灵敏性和可重复性.
• 它可以在各种细胞基质中有效检测和量化CHIKV,ZIKV和DENV.
• 这种低成本的测定方法有可能用于临床诊断,特别是在资源有限的地区.