在固定床生物反应器中使用稳定的生产细胞系连续制造晶状病毒载体
Dale J Stibbs1, Pedro Silva Couto1, Yasuhiro Takeuchi2,3
1Department of Biochemical Engineering, University College London, Bernard Katz Building, Gower Street, London WC1E 6BT, UK.
Molecular therapy. Methods & clinical development
|March 4, 2024
概括
通过在固定床生物反应器中使用稳定的生产细胞系实现了连续制造晶状病毒载体 (LVs). 这种方法提高了生产效率和可重复性,在没有诱导的情况下产生高质量的LV超.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物加工是一种生物加工.
- 基因治疗制造业 基因治疗制造业
背景情况:
- 连续制造在晶状病毒载体 (LV) 生产的批量工艺上具有优势,包括提高一致性和降低成本.
- 稳定的生产细胞系通过消除对等离子体DNA和转染试剂的需求,简化了LV生产.
- 固定床生物反应器适用于附着细胞的可扩展扩张,促进从传统培养方法过渡.
研究的目的:
- 建立和优化一个连续的制造工艺的lentiviral载体 (LVs) 使用一个稳定的生产者细胞系在一个固定床生物反应器.
- 评估 perfusion 速率和 pH 对 LV 产量和质量的影响.
- 为了证明连续制造过程的可重复性.
主要方法:
- 构成性地表达第三代LVs的细胞在iCELLis Nano固定床生物反应器中被培养和扩展.
- perfusion 速率从每天 0.5 到 2 个血管体积 (VVD) 变化.
- 培养液的pH值从7.20调整为6.85, perfusion速率为1.5VVD.
主要成果:
- 随着 perfusion 率的增加,LV 感染标位增加,在 1.5 VVD 时达到 7.87 × 104 TU cm-2 的峰值.
- 在1.5VVD时将pH优化为6.85,进一步提高了传染性产量,达到9.10×104TU cm−2.2.
- 该过程表明,无论是传染性还是物理性LV产量,每批的变异性都很低 (CV<10%),这表明其可重复性很高.
结论:
- 使用稳定的生产细胞系在固定床生物反应器中连续制造lentiviral载体是可行的和高效的.
- 优化的 perfusion 速率和 pH 值显著提高了 LV 产量和质量.
- 这种可扩展,可重复的过程为高质量的lentiviral vector超浮性生产提供了一个强大的平台.
