使用HPLC在mRNA生产过程中确定线性化pDNA模板
Marta Leban1, Tina Vodopivec Seravalli1, Martina Hauer2
1Sartorius BIA Separations d.o.o., Mirce 21, 5270, Ajdovščina, Slovenia.
Analytical and bioanalytical chemistry
|March 4, 2024
概括
一种新方法准确量化了信使RNA (mRNA) 疗法中的剩余等离子体DNA (pDNA). 这种具有成本效益和序列不可知性的方法有助于确保创新的mRNA疗法的安全性和质量.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分析化学 分析化学
- 制药科学 制药科学
背景情况:
- 使者RNA (mRNA) 疗法已经显示出显著的临床成功,特别是在COVID-19大流行期间.
- 产生mRNA涉及从等离子体DNA (pDNA) 进行体外转录,需要将残留的pDNA作为与过程相关的杂质去除.
- 目前的监管限制要求pDNA水平低于每人剂量10ng,强调需要敏感的检测方法.
研究的目的:
- 开发和验证一种通用,成本效益和序列不可知的分析程序,用于确定mRNA样本中的残留pDNA.
- 建立一种可靠的方法,在mRNA生产过程中进行过程中监测.
- 为mRNA质量控制提供量化聚合酶链反应 (qPCR) 的替代方案.
主要方法:
- 开发了一种涉及mRNA酶性降解,其次是离子交换高性能液态染色学 (HPLC) 分离的程序.
- 使用已建立的染色学方法对pDNA质量分析进行残留pDNA的量化.
- 验证该方法的量化极限 (LOQ) 为2.3 ng,检测极限 (LOD) 低于0.1 ng.
主要成果:
- 开发的方法成功量化了高灵敏度的mRNA样本中的剩余pDNA (LOQ: 2.3 ng,LOD: <0.1 ng).
- 该程序有效地用于对三个模型mRNA和一个自我放大RNA (saRNA) 的过程中监测.
- 与传统的qPCR方法相比,该方法证明了成本效益,速度和序列不可知性.
结论:
- 酶消化和染色分离方法为mRNA产品中的残留pDNA确定提供了强大的和敏感的方法.
- 这种通用程序可以在mRNA制造中作为qPCR的有价值替代品,增强分析策略.
- 该方法的效率和广泛适用性支持基于mRNA的治疗方法的质量控制和监管合规性.
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