为了实现向的Cas9 (CRISPR-Cas) 输送:使用分离中蛋白制备IgG抗体-Cas9合物
Tim Pasch1, Nicole Bäumer2, Sebastian Bäumer2
1Institute of Biochemistry, University of Münster, Münster, Germany.
概括
研究人员开发了一种新的CRISPR-Cas9传递方法,使用IgG抗体与Cas9-RNP通过分裂蛋白技术融合. 这种方法可以实现有针对性的交付,减少副作用,并为精确的基因编辑应用提供新的途径.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因工程是一种基因工程.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 克里斯普尔-Cas9基因编辑提供了革命性的潜力,但在向细胞传递方面面临着挑战.
- 预先形成的CRISPR-ribonucleoprotein (RNP) 复合体最大限度地减少了非目标效应,并避免了永久的基因组变化.
- 有效地将像Cas9-RNP这样的大型蛋白质复合体输送到点细胞是一个重大障碍.
研究的目的:
- 开发一种新的方法,利用内部化IgG抗体对CRISPR-Cas9 RNP复合体进行有针对性的输送.
- 为了研究蛋白质转接的可行性,通过分裂的intin调解,以与Cas9.9结合IgG抗体.
主要方法:
- 采用一种缺乏氨酸 (CL) 的分裂蛋白来有效地对抗体和Cas9前体进行翻译后结合.
- 在哺乳动物细胞中表达IgG抗体前体和在细菌细胞中表达Cas9前体.
- 净化IgG-Cas9结合体,加载sgRNA形成活性RNP,并在体外测试其DNA分裂活性.
主要成果:
- 通过CL分裂整蛋白系统,成功将单克隆IgG抗体前体与Cas9前体结合起来.
- 在实验室中证明了能诱导双链DNA断裂的活性IgG-Cas9 RNP复合物的形成.
- 展示了分裂蛋白的合成变体对Cas9.9的化学修饰的有用性.
结论:
- 为IgG-Cas9开发的分裂结合过程代表了CRISPR-Cas9传递的重大进步.
- 这种方法为使用预先形成的RNP复合体进行有针对性的CRISPR-Cas9交付的新策略提供了一个基本步骤.
- 这种方法有望提高基因编辑应用的精度和安全性.
