通过对生物过程和转染条件的多变量优化,产生高产量的重组腺相关病毒载体
Louis Coplan1,2, Zhe Zhang1, Nicole Ragone3
1Preclinical Manufacturing and Process Development, Regeneron Pharmaceuticals Inc, Tarrytown, New York, USA.
Biotechnology progress
|March 7, 2024
概括
使用FectoVIR-AAV优化复合腺相关病毒载体 (rAAV) 的产生,并设计实验,显著增加了1×10^12vg/mL以上的载体基因组标位. 这种方法可以提高基因治疗载体的产量,并且可以在多个AAV血清型中应用.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 基因治疗 基因治疗
- 过程优化 过程优化
背景情况:
- 复合腺相关病毒载体 (rAAVs) 对于基因疗法至关重要,有几种FDA批准的产品.
- 提高rAAV生产的产量对于推进基因疗法开发至关重要.
研究的目的:
- 为了优化rAAV8载体的悬浮生产过程,使用特定的转化试剂.
- 确定影响矢量产量的关键过程参数,并开发预测模型.
主要方法:
- 使用小型自动化生物反应器系统 (250毫升) 进行rAAV8生产.
- 采用了专注于生物反应器运行和转染条件的实验的多变量设计.
- 开发了模型来预测载体基因组 (vg) 标位,体 (cp) 标位和Vg:Cp百分比.
主要成果:
- 在优化过程中实现的载体基因组标位超过1 × 10^12vg/mL.
- 确定了五个关键参数:传染pH,生产pH,复合时间,传染时活性的细胞密度,以及传染试剂与DNA的比率.
- 使用优化过程,在6种测试的AAV血清型 (AAV1-9) 中,在5种AAV血清型 (AAV1-9) 中表现出改善的标位.
结论:
- 转染试剂的选择是提高rAAV载体产量的关键因素.
- 实验的多变量设计是优化生物生产过程的强大工具.
- 开发的优化策略可以被通用化,以加速新的AAV载体和基因治疗程序的开发.
