改进α-synuclein种子放大试验的协议:分析分析前和分析变量,并确定种子量化候选参数

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 生物化学 生物化学
• 测试开发 测试开发

背景情况:

• 阿尔法-同核素 (α-syn) 种子放大试验 (SAA) 对于检测错误折叠的α-syn.是至关重要的.
• 对于影响SAA性能和量化准确性的预分析和分析因素的了解有限.

研究的目的:

• 为了研究预分析变量的对脑脊液 (CSF) α-syn SAA实时震动诱导转换 (RT-QuIC) 试验的影响.
• 确定最佳的测试参数,以可靠量化错折的α-syn种子.

主要方法:

• 血液污染,添加洗剂,结解周期和延迟结对α-syn RT-QuIC的评估影响.
• 评估了板间和板内变异性,重组蛋白批量效应和参数变异性.
• 在串联CSF稀释中分析了动力曲线,以评估量化潜力.

主要成果:

• 血液污染 (≥0.01%) 和洗剂的添加显著改变了RT-QuIC动力学和正复制数.
• 增加样本复制,提高了结果的可重复性和高和低播种活动之间的区别.
• 在各种实验环境中,时间到值 (LAG) 成为最可靠的动力参数.

结论:

• 只有血液污染和洗剂添加被确定为影响α-syn RT-QuIC的显著预分析变量.
• 阳性复制的数量和LAG是量化α-syn播种活动的关键.
• 使用连续稀释和增加复制量的一致测量将推动α-syn RT-QuIC作为定量测试.