基于近距离标记的直角陷策略识别HDAC8通过调节皮质素乙化调节促进细胞运动
Yepei Huang1, Guijin Zhai2, Yun Fu3
1The Province and Ministry Co-sponsored Collaborative Innovation Center for Medical Epigenetics, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Disease (Ministry of Education), Tianjin Key Laboratory of Medical Epigenetics, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China; Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology Research, Department of Clinical Laboratory, Fujian Medical University Cancer Hospital, No. 420 Fuma Road, Jin'an District, Fuzhou 350014, Fujian Province, China.
一种新的方法,基于近距离标记的正角陷 (ProLORT),捕捉了细胞中短暂的酶后翻译修饰 (PTM) 相互作用. 这种方法确定了新的HDAC8基质,揭示了细胞运动调节的机制.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 传统的亲和方法难以捕捉细胞过程中至关重要的短暂的酶基质相互作用.
- 翻译后修改 (PTMs) 动态调节蛋白质的功能和相互作用.
- 在体内了解酶-PTM基质网络对于破译细胞信号至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新的策略,即基于近距离标记的正角陷 (ProLORT),用于研究活细胞中短暂的酶-PTM基质相互作用.
- 识别Histone Deacetylase 8 (HDAC8) 的新基质,并阐明其调节作用.
- 扩大用于分析动态PTM介导蜂网络的工具包.
主要方法:
- 使用APEX2酶进行近距离标签.
- 垂直的陷管道用于捕获相互作用的蛋白质.
- 定量蛋白质组学用于识别和量化标记蛋白质.
- 使用生物化学和细胞分析验证已识别的基质.
主要成果:
- 普罗洛特成功捕获了短暂的相互作用,通过评估已知的HDAC8基质,素H3K9ac.ac.证明了这一点.
- 确定了许多被认为是HDAC8准的乙化蛋白质.
- 在体内证实了catenin (CTTN) 是真正的HDAC8基质.
- 通过HDAC8介导的CTTN在lysine 144的脱乙基化被证明可以调节其与F-actin的相互作用,影响细胞运动.
结论:
- ProLORT是一种强大而可通用的策略,用于描述活细胞中PTM介导的过渡性酶基质相互作用.
- 这项研究扩大了对HDAC8调节机制的理解,特别是通过CTTN脱乙化对细胞运动中的作用.
- 这种方法为发现由酶调节的时空PTM网络提供了有价值的工具.
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