通过直角方法隔离和表征细胞外囊泡,用于开发眼内EV疗法
Justin Leung1,2, Dimitrios Pollalis2,3, Gopa K G Nair2,3
1USC Dornsife College of Letters, Arts and Sciences, University of Southern California, Los Angeles, California, United States.
Investigative ophthalmology & visual science
|March 11, 2024
概括
与超离心相比,触流过 (TFF) 为隔离细胞外囊泡 (EV) 提供了一种优越的方法,为潜在的EV疗法提供更高的纯度和数量.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 再生医学是一种再生医学.
- 眼科医生 眼科 眼科
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 对于细胞间的通信至关重要,并具有治疗潜力.
- 目前用于隔离EV的方法,如微分超离心法 (dUC),在产量,纯度和可重复性方面面临挑战.
- 开发用于EV隔离的标准化协议对于推进基于EV的治疗方法至关重要,特别是对于眼内应用.
研究的目的:
- 建立干细胞衍生的眼内EV治疗药物的临床前和临床研究框架.
- 评估触流过 (TFF) 作为一种可扩展和高效的方法来隔离小型电动汽车 (sEV).
- 为了比较通过TFF与dUC分离的sEV的产量,纯度和特征.
主要方法:
- 从人类胚胎干细胞衍生的视网膜色素表皮质 (hESC-RPE) 条件化的细胞培养基 (CCM) 中分离出小型EV (sEV).
- 使用微流体TFF装置 (ExoDisc,ED) 和差异超离心法 (dUC) 进行了隔离.
- 电动汽车的特征是使用直角方法来评估尺寸,数量和表面标记.
主要成果:
- 在相同量的CCM中,ED TFF装置产生的sEV比dUC高3-8倍.
- 与dUC相比,与ED隔离的sEV显示出更高的纯度和颗粒度.
- ED显示出出色的可扩展性和度能力,与输入体积高达10毫升的高相关性.
- 在ED和dUC方法中,sEV的表面标记特征是可比的.
结论:
- 触流过 (TFF) 是一个有价值的策略,用于隔离sEV用于眼内EV疗法.
- 为了高效的EV准备,需要优化TFF设备.
- 正角方法对于可靠地描述异质EVs至关重要.
