在Pichia pastoris中使用CRISPR/Cas9进行多重标志物少基因组集成
Jucan Gao1,2, Jintao Cheng1,2, Jiazhang Lian3,4,5
1Key Laboratory of Biomass Chemical Engineering of Ministry of Education, College of Chemical and Biological Engineering, Zhejiang University, Hangzhou, China.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|March 12, 2024
概括
一个新的CRISPR/Cas9工具包可以在Pichia pastoris中高效地整合多基因,从而创建先进的细胞工厂. 这有助于从甲醇中产生诸如2,3-butanediol之类的有价值化合物.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 合成生物学 合成生物学
- 微生物工程 微生物工程
背景情况:
- 皮奇亚牧师是一种具有高蛋白表达能力的甲基酵母.
- 它利用甲醇作为碳源的能力使其成为C1生物转化的一个有希望的平台.
- 有限的合成生物学工具阻碍了对P. pastoris.多基因通路的操纵.
研究的目的:
- 建立一个CRISPR/Cas9系统,以便在P. pastoris.中高效地进行多重基因组集成.
- 开发一种工具包,用于构建具有多个异质基因的P. pastoris细胞工厂.
- 为了证明该系统在工程中的应用,P. pastoris用于2,3-butanediol (BDO) 的生产.
主要方法:
- 开发基于CRISPR的多重基因组集成工具包.
- 用于基因整合的供体质粒的构建.
- 准备有能力的P. pastoris细胞和转化.
- 变压器和通路功能的验证.
主要成果:
- 成功建立了CRISPR/Cas9系统,以在P. pastoris.中有效地整合多基因.
- 通过构建工程P. pastoris用于甲醇转化为BDO的工具包实用性的演示.
- 为建造P. pastoris细胞工厂提供了详细的协议.
结论:
- 开发的CRISPR工具包显著提高了P. pastoris.合成生物学能力.
- 这有助于建造强大的P. pastoris细胞工厂,通过多基因通路生产高价值化合物.
- 奠定了先进的C1生物转化应用在P. pastoris.中的基础.
