简化,单步非病毒CRISPR-Cas9淘汰策略提高了原发性人类冠状细胞群中的基因编辑效率

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 再生医学是一种再生医学.

背景情况:

• 对于软骨组织工程和疾病研究来说,CRISPR-Cas9基因编辑至关重要.
• 初级冠状细胞难以转移和在培养中脱差,阻碍了遗传研究.
• 现有的细胞模型很难模仿人类软骨组织的特性.

研究的目的:

• 开发一种非病毒性CRISPR-Cas9批量基因编辑方法,用于冠状细胞.
• 为了使功能遗传学研究和推进治疗策略的软骨疾病.

主要方法:

• 选电穿孔和脂质纳米颗粒用于细胞中的核糖核蛋白 (RNP) 输送.
• 优化了RNP组件并执行了RELA (核因子卡帕B子单位) 淘汰赛 (KO).
• 使用RT-qPCR,西布洛特特征KO细胞,并评估了冠状动能潜力.

主要成果:

• 电穿孔被证明是冠状细胞转染的最佳方式,提高了效率和生存能力.
• 实现了~90%的RELA KO效率,减少了炎症通路的激活.
• 成功地将该协议应用于各种原发性冠状细胞和细胞系,包括骨关节炎患者的细胞.
• 雷拉科冠状细胞保留了冠状细胞的能力,并且在炎症下显示出增强的矩阵保留.

结论:

• 展示了一种强大的非病毒性大量基因编辑方法,用于冠状细胞.
• 该方法在软骨研究中促进了自身/异基因基因疗法和功能遗传学.
• 能够解开软骨和类风湿性疾病的分子机制.