一种基于FACS的新型分离技术在口腔状细胞癌中识别异质CTC
Anshika Chauhan1, Arnab Pal1, Meenakshi Sachdeva2
1Department of Biochemistry, Post Graduate Institute of Medical Education and Research, Chandigarh, India.
Frontiers in oncology
|March 12, 2024
概括
我们开发了一种新的方法来检测血液中的循环瘤细胞 (CTC),实现高灵敏度和灵活性. 这种技术是负担得起的,适合发展中国家,使得CTC的下游分子分析.
科学领域:
- 在瘤学瘤学.
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 循环瘤细胞 (CTC) 是癌症检测和监测的关键生物标志物.
- 目前的CTC隔离方法面临的挑战是由于细胞丰度低,异质性,以及在印度等地区先进技术的有限可用性.
- 对于各种下游应用,需要改进,灵活和可访问的CTC检测和隔离策略.
研究的目的:
- 开发一种新,高效和用户友好的策略,用于检测和隔离循环瘤细胞 (CTC).
- 创建一个灵活的CTC隔离技术,适合各种下游应用,在资源有限的环境中可访问.
- 解决现有的CTC检测方法的局限性,特别是在印度的背景下.
主要方法:
- 一个多步骤的CTC隔离策略,结合了密度梯度离心,血液细胞的免疫磁性耗尽和光激活细胞分类 (FACS).
- FACS采用了严格的封闭策略来排除碎片和死细胞,使用多个CTC特定的表面标记物 (EpCAM,EGFR,Pan-Cytokeratin) 和一个EMT标记物 (Vimentin).
- 验证涉及将癌细胞注入健康捐献者的血液,并对口腔状细胞癌 (OSCC) 患者进行测试,随后通过Giemsa染色,免疫染色,全转录组放大 (WTA),qRT-PCR,体外培养和RNA-Seq.进行确认.
主要成果:
- 开发的方法实现了尖癌细胞的平均检测效率为32.82%±12.71%.
- 大约75%的OSCC患者 (71/95) 显示可检测的CTC,CTC阳性独立于TNM分期.
- 孤立的CTC在尺寸和标记物表达方面呈现异质性,并且适合下游应用,包括短期培养和RNA测序.
结论:
- 一种灵敏,特定,灵活和负担得起的CTC检测和隔离技术已经成功开发出来.
- 该方法可扩展到更大的患者队列,捕获CTC异质性,并为分子分析分离可活细胞.
- 这种创新技术特别适合发展中国家,为癌症研究和诊断提供了宝贵的工具.
