在生物反应器收获过程中,宿主细胞蛋白质污染的蛋白质组学分析
Da Zhang1, S Ranil Wickramasinghe1, Andrew L Zydney2
1Ralph E. Martin Department of Chemical Engineering, University of Arkansas, Fayetteville, Arkansas, USA.
Biotechnology progress
|March 13, 2024
概括
这项研究确定了宿主细胞蛋白质 (HCPs),这些蛋白质在中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞生物反应器收获过程中导致膜污染. 一种新的反冲洗方法有效地去除了这些污染物,有助于治疗性蛋白质净化.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物加工是一种生物加工.
- 细胞培养技术 细胞培养技术
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于生产治疗性蛋白质至关重要.
- 在生物反应器采集过程中,膜污染会阻碍下游净化.
- 宿主细胞蛋白 (HCP) 代表了重要的净化挑战.
研究的目的:
- 在CHO细胞生物反应器收获过程中识别HCP污染物.
- 用一个特定的膜来描述污染行为.
- 开发一种有效的化方法,用于的膜.
主要方法:
- 使用反向不对称膜BioOptimalTM MF-SL用于细胞澄清.
- 开发了一种用于HCP和DNA化的新反冲洗工艺.
- 使用二维凝电泳 (2D SDS-PAGE) 进行了医疗保健人员的特征.
- 通过矩阵辅助激光脱/离子化质谱学 (MALDI-MS) 确定了特定的医疗保健人员.
主要成果:
- 一种新的反冲洗过程成功地从杂的膜中除了HCP和DNA.
- 标志着主要医疗保健人员的同电点 (PI) 和分子重量 (MW).
- 确定了8个HCP,主要是酶或外体相关蛋白.
- 这些已识别的医疗保健人员可以形成亚微米颗粒,有助于过器堵塞.
结论:
- 确定了负责CHO细胞采集中的膜污染的关键HCP.
- 开发的反冲洗方法可以有效地清洁过膜.
- 了解污染物成分有助于优化生物制品下游净化策略.
