简单的分离和培养初级水牛 (Bubalus bubalis) 子宫内膜上皮细胞 (pBuEECs) 的方法,并使用高吞吐量蛋白质组学方法进行其表征

科学领域:

• 生殖生物学 生殖生物学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 牲畜中的早期胚胎死亡通常源于植入期间胚胎与子宫相互作用失败.
• 了解植入的分子机制需要同步的胎儿与母亲的沟通.
• 体外模型对于剖析植入过程的特定阶段至关重要.

研究的目的:

• 建立一种简单的方法来隔离和培养水牛初级子宫内膜上皮细胞 (pBuEECs).
• 执行这些培养细胞的蛋白质组概况,以识别植入过程中涉及的关键蛋白质.
• 验证pBuEECs作为研究子宫病理生理学的体外模型的实用性.

主要方法:

• 使用原酶I和细胞细分剂分离子宫上皮细胞 (UEC).
• 通过PCR培养UEC并通过PCR确认上皮细胞标记物 (KRT18,PGR,ESR1,LIF).
• 细胞纯度的评估使用细胞克拉丁18免疫染剂 (大约. 99%的纯度). 这是一个很好的方法.
• 使用高通量双重质谱 (MS) 的pBuEECs的蛋白质组概况.
• 对已识别的蛋白质进行生物信息学和KEGG通路分析.

主要成果:

• 成功分离和培养了表皮质形态和标记特征的pBuEECs.
• 通过蛋白质组分析,通过pBuEECs识别了总共3383种蛋白质.
• 生物信息学分析揭示了细胞,代谢,调节,信号和发育过程中的丰富.
• 基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基因基基基因基因基因基因基因基因基因基基因基因基因基基基基基因基因基因基因基因基基因基基基基基因基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基基

结论:

• 描述的pBuEECs为研究植入提供了一个强大的体外模型.
• 这种模型有助于理解水牛和其他牲畜子宫病理生理学的分子基础.
• 使用这种模型进行进一步的研究可以帮助缓解早期胚胎死亡率并提高生殖效率.