SAS: 分离抗生素选择用于识别改善蛋白质溶解性的伴侣物
Emily McNutt1, Na Ke1, Alexandre Thurman1
1New England Biolabs, 240 County Road, Ipswich, MA 01938, USA.
Heliyon
|March 18, 2024
概括
研究人员开发了一种分离抗生素选择 (SAS) 系统,以改善大肠杆菌中复合蛋白溶解度. 这种方法将蛋白质折叠与细胞活力联系在一起,从而能够有效地选择有益的伴侣来增强蛋白质的生产.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 在大肠杆菌中异质蛋白表达对研究和工业至关重要.
- 在大肠杆菌中获得可溶和活性重组蛋白质存在重大挑战.
- 目前提高蛋白质溶解度的方法往往耗时,缺乏通用解决方案.
研究的目的:
- 开发一种用于选择蛋白质折叠因子的新型遗传系统.
- 直接将蛋白质溶解度与细胞活力联系起来,以进行高效的查.
- 创建一个多功能工具,以改善重组蛋白质的生产.
主要方法:
- 开发了一种分离抗生素选择 (SAS) 系统,使用与氨基糖化物7′′-转化酶-Ia (APH(7′′)) 的三方融合.
- 在APH的编码序列中插入了目标蛋白,以创建依赖于溶解度的乙基胺抗性.
- 利用陪伴图书馆进行聚合基因选择,以确定可溶性增强因素.
主要成果:
- 证明了SAS功能与人类线粒体Hsp70 ATPase域及其辅助器Hep.
- 展示了细胞中乙素耐药性与三方融合蛋白的溶解度直接相关.
- 通过聚合SAS查成功识别了可以提高客户端蛋白质溶解度的陪伴剂.
结论:
- 三方APH ((7") 聚变系统有效地将in vivo蛋白质溶解度与乙菌素抗性联系起来.
- SAS可以选择辅助物来增强各种客户端蛋白质的可溶性.
- 该系统简化了最佳折叠条件的识别,减少了对个别测试的需求.
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