在大鼠中进行PCR基因定型的直肠样DNA采集协议

科学领域:

• 动物研究伦理 动物研究伦理
• 分子生物学技术分子生物学技术.
• 实验室动物科学 动物科学

背景情况:

• 实验室动物基因定型的标准DNA采集方法涉及组织截肢,导致动物的痛苦和伤害.
• 目前还缺乏用于基因定型的DNA获取的直肠抽样的经过验证,非侵入性协议.

研究的目的:

• 评估各种直肠抽取参数对DNA质量和随后的聚合酶链反应 (PCR) 放大的影响.
• 开发和介绍一个基于证据的,非侵入性协议,用于有效的实验室动物基因定型.

主要方法:

• 系统评估直肠擦拭技术,变化每个样本的擦除数量.
• 对大约1800个基对的目标进行DNA产量和PCR放大成功的评估.
• 从直肠拭子获得的PCR结果与从传统耳样本获得的PCR结果进行比较.

主要成果:

• 用2至8个直肠取取的样本产生了足够的DNA,用于成功的PCR放大目标到1800bp.
• 直肠抽样产生了与耳部剪切样本相比质量的PCR结果.
• 剩余便或细胞碎片的存在不会对PCR结果质量产生负面影响.

结论:

• 直肠抽样是一种可行的,非侵入性方法,用于实验室动物的DNA采集.
• 开发的协议允许使用商业标准PCR试剂进行快速 (3-5小时的子),可重复和人道的基因型鉴定.