在细胞体和细胞骨突起中对F-actin进行定量超分辨率成像,使用基于Phalloidin的单分子标记和定位显微镜

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 显微镜的使用方法
• 生物物理学的生物物理.

背景情况:

• 丝状动蛋白 (F-actin) 对细胞结构和动态至关重要.
• 超分辨率显微镜技术是纳米级F-actin可视化所需的.
• 现有的方法可能会在样本保存和一致的量化方面扎.

研究的目的:

• 开发和验证用于增强F-actin成像的单分子标记和定位显微镜 (SMLLM) 方法.
• 为提高超分辨率显微镜利用法洛伊丁的特性.
• 为了证明一致的F-actin量化和细胞结构的保存.

主要方法:

• 用于单分子标记和定位显微镜 (SMLLM) 的染料结合法洛伊丁.
• 优化成像缓冲条件,以促进法洛伊丁解离,以增强标签.
• 将SMLLM应用于U2OS细胞和树突细胞 (DCs),将结果与直接随机光学重建显微镜 (dSTORM) 进行比较.

主要成果:

• 实现了F-actin结构的增强超高分辨率成像.
• 证明了对机械力敏感的细胞结构的改善保存.
• 与dSTORM相比,在DC中显示出更一致的F-actin量化.
• 在DC中观察到F-actin再分配和改变膜纤维的流行在暴露于脂多糖时.

结论:

• 基于法洛因的SMLLM为纳米级F-actin成像提供了一种强大的方法,具有卓越的结构保存和量化.
• 这种技术为研究动态F-actin对刺激的反应重新排列提供了有价值的工具.
• 开发的SMLLM方法有可能在蛋白质特定单分子成像中得到更广泛的应用.