在Click-iT检测和超分辨率的部分中,对核细胞超结构和植物复制的CLEM分析
Michal Franek1, Lenka Koptašíková2,3, Jíří Mikšátko2
1Mendel Centre for Plant Genomics and Proteomics, Central European Institute of Technology (CEITEC), Masaryk University, Kamenice 5, CZ-62500, Brno, Czech Republic. 357550@mail.muni.cz.
Nature communications
|March 20, 2024
概括
这项研究提出了一种新的相关光电子显微镜 (CLEM) 方法,用于植物细胞. 改进的工作流提高了对Arabidopsis thaliana突变物DNA复制和核组织的成像.
科学领域:
- 植物细胞生物学 植物细胞生物学
- 显微镜技术的使用方法
- 分子成像学分子成像学
背景情况:
- 相对光和电子显微镜 (CLEM) 对于纳米尺度亚细胞定位至关重要.
- 由于组织透性和标签问题,植物生物学面临着采用CLEM的挑战.
- 现有的方法难以在复杂的3D植物组织中索引和重新定位特征.
研究的目的:
- 为植物细胞开发和验证一个改进的CLEM工作流.
- 为了克服植物组织透性和光标签效率的局限性.
- 分析Arabidopsis thaliana突变体中的DNA复制和核组织.
主要方法:
- 开发了一个CLEM工作流程,涉及甲酸盐树脂嵌入.
- 使用单分子定位显微镜 (SMLM) 和传输电子显微镜 (TEM).
- 在Arabidopsis thaliana的超薄截面上应用连续和相同截面的CLEM.
主要成果:
- 甲烯酸树脂嵌入与SMLM兼容,并改善光体闪.
- 通过使用Click-iT乙脱氧氨标签成功可视化了DNA复制部位.
- 在野生类型和突变的阿拉比多普西斯植物中分析了S相进展和核组织.
结论:
- 开发的CLEM工作流在植物细胞成像方面是有效的.
- 这种方法有助于研究植物中的分子过程和亚细胞组织.
- 这种方法对于研究具有异常核细胞表型的植物突变有价值.
