建立和评估在生物制剂中特定于过程的残留宿主细胞蛋白和残留宿主细胞DNA的检测方法
Yixiao Tian1, Xinyue Wang1, Dongyan Shao1
1Key Laboratory for Space Biosciences and Biotechnology, School of Life Sciences, Northwestern Polytechnical University, Xi'an, Shaanxi, China.
Cell biochemistry and function
|March 20, 2024
概括
这项研究开发了敏感的方法来检测生物制品中的Escherichia coli宿主细胞蛋白 (HCP) 和DNA (rcDNA) 的残留物. 特定于过程的ELISA和滴滴数字PCR (ddPCR) 提供了比标准方法更高的精度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分析化学 分析化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 准确检测残留宿主细胞蛋白 (HCP) 和DNA (rcDNA) 对重组生物安全至关重要.
- 现有的方法可能无法充分检测来自大肠杆菌的过程特异性杂质.
研究的目的:
- 建立准确的,特定于过程的检测方法,用于E. coli HCP和rcDNA在重组生物制剂中.
- 评估这些新方法的性能与传统测试相比.
主要方法:
- 开发了一种使用特定抗体对大肠杆菌HCP进行特定过程的酶链接免疫吸收试验 (ELISA).
- 使用滴滴数字PCR (ddPCR) 针对16S基因,以绝对量化大肠杆菌rcDNA.
- 将特定于过程的ELISA与商用非特定于过程的ELISA套件进行比较.
主要成果:
- 开发的特定工艺的ELISA显示出高灵敏度 (338 pg/mL) 并检测出比商业套件更多的62%的医疗人员.
- ddPCR提供了rcDNA的绝对量化,在精度上超过qPCR,并区分稀释样本.
- 这些新方法在杂质检测准确度上显著改善.
结论:
- 特定于工艺的ELISA对于检测大肠杆菌HCP杂质非常敏感.
- 绝对定量的ddPCR为rcDNA检测提供了更高的准确性,并且是qPCR的潜在替代品.
- 这些先进的方法提高了生物制造的安全性和质量控制.
