在哺乳动物表达系统中进行NMR的有效和经济的蛋白质标记:应用于T细胞前和T细胞受体蛋白质
Robert J Mallis1,2,3, Jonathan J Lee1,2, Arjen Van den Berg4
1Laboratory of Immunobiology, Dana-Farber Cancer Institute, Boston, Massachusetts, USA.
Protein science : a publication of the Protein Society
|March 21, 2024
概括
这项研究引入了一种新的基于人类细胞的表达系统,用于蛋白质的同位素标记,克服了细菌系统对T细胞受体等复杂蛋白质的局限性. 该方法使核磁共振 (NMR) 研究的高效标记和高产蛋白生产成为可能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 结构生物学 结构生物学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 蛋白质核磁共振 (NMR) 光谱需要同位素标记的蛋白质,通常在大肠杆菌中产生.
- 大肠杆菌表达系统面临的局限性是需要特定的翻译后修改的蛋白质,例如二硫化键或糖化,阻碍功能折叠.
- T细胞受体和T细胞前受体是难以在大肠杆菌中功能表达的蛋白质的例子.
研究的目的:
- 开发和验证使用人类细胞系对蛋白质进行同位素标记的新型表达系统.
- 证明该系统能够产生功能性,同位素标记的蛋白质,包括具有复杂修饰的蛋白质.
- 为了使NMR光谱学高质量的蛋白质样本的高效生产.
主要方法:
- 利用一种非粘附的人类胚胎细胞系 (Expi293F) 与一种专门的介质进行蛋白质表达.
- 应用该系统来表达T细胞受体和T细胞前受体的β子单元.
- 开发并实施了一种氨基酸特异性标签协议,用于有针对性的纳入同位素和氨基酸.
主要成果:
- 成功建立了基于人类细胞的表达系统,用于蛋白质的同位素标记.
- 在没有显著的混的情况下,实现了特定氨基酸 (Phe,Ile,Val,Leu) 的高效,有针对性的同位素标记.
- 证明了蛋白质与化氨基酸的表达.
- 从使用最小标记氨基酸 (<20毫克) 的小培养体 (30毫升) 中获得高度 (200微米) 的NMR准备的蛋白质样本.
结论:
- 开发的Expi293F表达系统为具有挑战性的蛋白质的同位素标记提供了一个强大的平台.
- 该系统克服了大肠杆菌的局限性,促进了对需要特定翻译后修改的蛋白质的研究.
- 高效的标签和高产量使使用NMR光谱学进行先进的结构和功能分析成为可能.
关键词:
使用19F标签.在Expi293F中使用.T细胞受体 (TCR) 是一种T细胞受体.葡萄糖酶化是什么? 葡萄糖酶化是什么?地方的化.哺乳动物表达方式甲基TROSYY的使用情况核磁共振光谱学 (NMR) 是一种技术.在T细胞前受体 (preTCR) 中.更多相关视频
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