开发一种基于素的闭管循环介导异热放大试验,以检测沙门氏菌spp. 在生肉样本中
Khristine B Balaga1, Rance Derrick N Pavon1, Alyzza Marie B Calayag1
1Pathogen-Host-Environment Interactions Research Laboratory, Institute of Biology, College of Science, University of the Philippines Diliman, Quezon City 1101, Philippines.
Journal of microbiological methods
|March 21, 2024
概括
一种新的基于素的循环介导异热放大 (LAMP) 测定方法提供了一种快速,灵敏和具有成本效益的方法来检测食品中的沙门氏菌. 与传统PCR相比,这种测试显示出更高的灵敏度,增强了食品安全监督.
科学领域:
- 食品安全与公共卫生问题
- 微生物学和分子诊断 微生物学和分子诊断
背景情况:
- 沙门氏菌 spp. 沙门氏菌 它们是导致全球爆发的重要食物传播病原体,需要有效的监测.
- 传统的培养方法和传统的分子技术 (PCR,qPCR) 检测沙门氏菌是耗时的,昂贵的,需要专门的设备.
- 循环介导同热放大 (LAMP) 是一个有前途的替代方案,因为它的简单性,速度,低成本和高灵敏度不需要专门的设备.
研究的目的:
- 开发和优化一种基于素的闭管LAMP试验,用于使用inVA基因检测沙门氏菌.
- 评估和验证与传统PCR相比,开发的LAMP试验的性能.
- 评估该试验在食品动物生产链中改善沙门氏菌监测的潜力.
主要方法:
- 开发和优化一种基于素的闭管LAMP试验,针对沙门氏菌inVA基因.
- 使用DNA度和细胞计数,对LAMP测定和常规PCR测定之间的灵敏度和特异性的比较分析.
- 在使用常规培养丰富和缩短丰富协议的341个生肉样本上验证了优化的LAMP测定.
主要成果:
- 优化的LAMP试验表现出高的特异性和灵敏度,在1 ng/μL以下的DNA度下,显示出比传统PCR高10倍的灵敏度.
- 在细胞数量方面,LAMP测定比传统PCR敏感1000倍 (4.8 × 10^3细胞/毫升对比4.8 × 10^7细胞/毫升).
- 丰富后对341个原肉样本进行的测试显示,LAMP检测率为100%,而传统PCR检测率为100%,99.04%和96.64%,分别为肉,牛肉和猪肉. 一个缩短的缩协议降低了LAMP的准确性.
结论:
- 基于素的优化LAMP测定是一种高度敏感和特定的沙门氏菌检测方法,性能优于常规PCR.
- 当与传统的丰富方法相结合时,LAMP测定显著提高了生肉样本中的沙门氏菌检测能力.
- 这种LAMP测定具有相当大的潜力,可以作为一种补充或替代工具来加强食品安全监督并保护全球的公共健康.
