开发一个照顾点微流体RNA提取幻灯片,用于照射后的基因表达诊断

科学领域:

• 生物技术和生物医学工程 生物技术和生物医学工程
• 分子生物学和基因组学
• 辐射生物学和医学对策

背景情况:

• 放射性/核紧急情况构成重大威胁,需要对急性辐射综合征 (ARS) 等疾病进行快速诊断.
• 从全血中提取常规RNA是耗时的,需要专门的设备,并为现场部署带来挑战.
• 在紧急情况下及时进行医疗干预,就诊点诊断至关重要.

研究的目的:

• 为了缩小RNA提取,使用基于微流体的幻灯片 (MBS) 进行临床诊断.
• 评估MBS作为迈向实验室芯片设备用于基因表达 (GE) 分析的初步步骤.
• 评估MBS在预测血液性急性辐射综合征 (HARS) 严重程度或识别RNA微生物方面的实用性.

主要方法:

• 来自健康捐献者的全血样本被辐射,以模拟不同程度的ARS.
• 用初步的基于微流体的幻灯片 (MBS) 提取RNA,并与传统的基于列 (CB) 的RNA提取相比较.
• 使用qRT-PCR分析了四种辐射诱导基因 (FDXR,DDB2,POU2AF1,WNT3) 的RNA质量,数量和基因表达.

主要成果:

• 与CB方法相比,MBS在提取时间的一半内产生了全血总RNA的两倍 (12.0 ± 5.8 μg vs. 6.6 ± 3.2 μg).
• 所有的MBSRNA提取物没有DNA,而30%的CB提取物被DNA污染.
• 尽管MBS的RNA完整性 (RINe) 值较低,但基因表达折叠变化与CB方法相当,表明没有显著的RNA降解.

结论:

• 初步的MBS显示出显著的优势,包括缩短提取时间,消除DNA污染,降低血液样本的要求.
• 该MBS提供与传统方法相比的基因表达分析性能,使其适用于现场应用.
• 这种微流体方法是开发便携式芯片实验室设备的有希望的一步,用于在辐射紧急情况下快速,即时诊断.