使用-交换质谱测量对冷化人类G-CSF中的固态相互作用的研究
Victoria E Wood1, Mark-Adam Kellerman1, Kate Groves2
1Department of Biochemical Engineering, University College London, London WC1E 6BT, United Kingdom.
Molecular pharmaceutics
|March 22, 2024
概括
固态/交换质谱学 (ssHDX-MS) 评估了冷化颗粒细胞殖民地刺激因子 (G-CSF) 配方. 糖提供了对聚合的最佳保护,而其他辅助剂提供了较低的稳定性.
科学领域:
- 生物物理化学 生物物理化学
- 蛋白质配方科学 蛋白质配方科学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 建立了/交换质谱法 (HDX-MS),用于研究液体配方中的蛋白质辅助剂相互作用.
- 固态HDX-MS (ssHDX-MS) 是一种分析冷解蛋白质的新技术.
- 颗粒细胞殖民地刺激因子 (G-CSF) 易于在冷化过程中聚合,影响其活性.
研究的目的:
- 将ssHDX-MS与基映射应用于四种解热化G-CSF配方.
- 评估三种不同的辅助物质 (糖,氨酸,曼尼托尔) 对局部蛋白质结构和稳定性的影响.
- 为了将乳吸收与冷化和储存后的G-CSF稳定性相关联.
主要方法:
- 固态/交换质谱 (ssHDX-MS) 在冷化G-CSF配方上进行.
- 用片映射来确定不同吸收的区域.
- 测量G-CSF单体含量作为储存在-20°C和45°C后的稳定性指标.
主要成果:
- 在冷化和在-20°C储存后,在22°C的吸收与单体含量相关.
- 糖提供了最高的保护,其次是氨酸,曼尼托尔,没有辅助剂.
- 在45°C储存后,没有观察到吸收量和单体含量之间的明显相关性.
- 片映射表明,在特定区域 (小螺旋,循环AB/CD,螺旋C) 的稳定性增加增加了对冷化的耐受性.
结论:
- 在22°C的ssHDX-MS有效地预测了在-20°C储存的冷化配方中的G-CSF稳定性.
- 糖是一种非常有效的辅助剂,可以在冷化和短期储存期间保护G-CSF.
- G-CSF的聚合机制可能包括在液态和冷化状态下类似的结构变化,具体结构元素的参与表明了这一点.
