生物样本中维生素D及其代谢物的分析 - - 第二部分:优化肝组织样本制备方法的优化

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 从肝组织中提取脂性维生素D化合物及其代谢物是分析上具有挑战性的,因为其度低,矩阵复杂.
• 现有的方法经常在极地和非极地维生素D形式的效率和选择性方面扎.

研究的目的:

• 优化一种两步提取方案,将固体-液体提取 (SLE) 和固体相提取 (SPE) 结合起来,用于肝组织中的维生素D代谢物.
• 为了比较两个SPE策略 ("绑定和解脱"与"删除"),提高选择性和灵敏度.
• 在小鼠肝脏组织中量化维生素D及其氧化和化代谢物.

主要方法:

• 使用各种溶剂 (乙醇,乙二,甲醇,乙,赫普坦,赫普坦/异醇) 优化SLE,选择乙进行最高回收.
• 开发和优化两种SPE策略 ("绑定和解离"和"去除") 使用水友性-脂友性平衡吸附剂.
• 使用超高性能超临界流体染色学 (UHPSFC) 和超高性能液体染色学 (UHPLC) 结合双重质谱法 (MS/MS) 的分析.

主要成果:

• 乙在SLE中表现出最佳的性能,氧化形式的恢复率为67-98%,脂性维生素D和的恢复率为3-28%.
• "去除策略"的SPE产生了更高的整体恢复 (47-123%),但显示了矩阵效应 (3-51%),而"绑定和解脱"的恢复较低 (3-24%) 但没有矩阵效应.
• 这两种方法都符合欧洲药物管理局 (EMA) 的准确性和精度标准;由于其效率和更低的溶剂消耗,选择了"去除策略".

结论:

• 优化的"去除策略"SPE方法可以首次确定小鼠肝脏中的维生素D,化和化代谢物.
• 在肝脏组织中检测出维生素D Ester 支持它们作为维生素D在脂性组织中的储存形式的作用.
• 这种优化的提取技术为分析复杂生物矩阵中的维生素D代谢物提供了灵敏可靠的方法.