用人类髓状细胞进行基因表达分析的收集和处理条件的评估

科学领域:

• 血液学 血液学 血液学
• 分子生物学分子生物学
• 临床诊断 临床诊断 临床诊断

背景情况:

• 周围血液单核细胞 (PBMC) 在急性髓性白血病 (AML) 等疾病的基因表达分析中至关重要.
• 爆细胞丰富通常是必要的,但需要从临床场所运输到中央实验室,在未定义的最佳条件下.
• 标准化样品运输对于可靠的基因表达研究至关重要.

研究的目的:

• 建立最佳的样本处理和运输条件,用于对来自人类PBMCs的净化细胞部分进行基因表达分析.
• 评估储存温度,持续时间和管类型对细胞活力和RNA完整性的影响.
• 确定在分析之前在PBMC中保存基因表达特征的最佳方法.

主要方法:

• 分析了外周血液单核细胞 (PBMCs) 的分化集群 (CD) 33+髓状细胞作为CD34+/CD33+爆细胞的替代品.
• 在加工前,样品在各种条件下 (温度,持续时间,管类型) 存储.
• 磁激活细胞分类 (MACS) 用于细胞净化.
• 评估了细胞活力,RNA完整性和基因表达特征.

主要成果:

• 使用MACS成功净化了CD33+髓状细胞.
• 细胞活力和RNA完整性在储存时间长达48小时内保持.
• 在4°C的存储对基因表达的影响最小,而室温诱导衰老路径.
• 在最大限度地减少基因表达变化方面,CPT管表现优于乙烯二胺三酸 (EDTA) 管.

结论:

• 建议在CPT管中在4°C保存长达48小时,以保存PBMC中的基因表达特征.
• 这些发现为基因表达研究中的样本处理提供了关键的指导方针,这些研究使用了纯化的细胞分数.
• 在临床研究中,尽量减少预分析变异是准确基因表达分析的关键.