对于类保留时间预测的终极解决方案:柱温度对分离选择性的影响

科学领域:

• 蛋白质组学是指蛋白质组学.
• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 逆相液态色谱与双重质谱学 (LC-MS/MS) 结合,是自下而上蛋白质组学的基石.
• 列温度是影响分离和识别效率的关键参数.

研究的目的:

• 为了研究柱体温度对逆相LC-MS/MS中的分离选择性的影响.
• 为了确定最佳的温度范围,以最大限度地提高的识别在自下而上的蛋白质组学.
• 了解温度对质保留行为的影响,并确定潜在的降解.

主要方法:

• 在不同的柱体温度 (25,35,45,和55°C) 进行了二维 (2D) LC-MS/MS采集.
• 对未经修改和双重质量标签 (TMT) 标记的样品的分析.
• 基于温度变化,开发基于类保留转移的预测模型.

主要成果:

• 由于分离的改善,保留的减少和列上潜在的降解,的识别在45-55°C时达到高原.
• 大约确定了10万种独特的非修饰和12万种独特的TMT标记.
• 随着温度的增加,的保留率线性下降 (无标签和TMT标签的酸分别为0.56%和0.5%每10°C).

结论:

• 列温度是优化基于LC-MS/MS的蛋白质组学中的鉴定的一个关键因素.
• 基于保留转移的预测模型可以指导温度选择,以提高覆盖率.
• 将柱子冷却到0°C可能会使可检测的三性增加3%,而在90°C可能会损失~20%.