基于RAA-CRISPR Cas12a系统的Listeria monocytogenes的快速核酸检测 基于RAA-CRISPR Cas12a系统

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 食品安全 食品安全
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 李斯特菌单细胞菌是一种危险的食源性病原体,引起高死亡率的李斯特菌病.
• 现有的L. monocytogenes检测方法缺乏所需的灵敏度,速度和操作方便性.
• 受污染的食品,特别是动物衍生和冷藏产品,对公众健康构成重大风险.

研究的目的:

• 开发一种高度灵敏,快速和用户友好的核酸检测技术来检测L. monocytogenes.
• 建立一个辅助复合酶放大 (RAA) 辅助的CRISPR/Cas12a光平台.
• 评估RAA-CRISPR/Cas12a系统在食品矩阵中检测L. monocytogenes的性能.

主要方法:

• 开发一种辅助复合酶放大 (RAA) 的辅助CRISPR/Cas12a光试验.
• 使用纯细菌培养和基因组DNA测试灵敏度.
• 评估对各种李斯特菌种和其他常见病原细菌的特异性.
• 验证使用与L. monocytogenes添加的丰富牛肉样本.

主要成果:

• 在RAA-CRISPR/Cas12a测定显示高灵敏度 (350CFU/mL和5.4×10^-3 ng/μL) 和特异性.
• 在2小时内检测到2.3CFU/25g的L. monocytogenes在丰富的牛肉样本中.
• 结果可以在5分钟内观察到,放大在20-30分钟内完成.
• 比国家标准方法快得多,更灵敏.

结论:

• 已建立的RAA-CRISPR/Cas12a系统为诊断食物传播病原体提供了一个有前途的新工具.
• 该方法为食品安全应用中检测L. monocytogenes提供了一种快速,灵敏和特定的方法.
• 该系统的效率超过了当前的国家标准,提高了食品传播病原体监测.