一个方便的基于RPA-CRISPR的测试方法,用于Salmonella enterica和Serovar Indiana的检测
Jiansen Gong1,2, Di Zhang3, Lixia Fu4
1Poultry Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Yangzhou 225125, China.
Microorganisms
|March 28, 2024
概括
新的一步诊断测试使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 和CRISPR/Cas12b技术准确检测出沙门氏菌印第安纳感染. 这种快速而敏感的测试为在食品安全应用中识别印第安纳沙门氏菌提供了有希望的工具.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 分子诊断学 分子诊断
- 食品安全 食品安全
背景情况:
- 沙门氏菌 (Salmonella enterica serovar) 印第安纳州 (S.Indiana) 是全球食物传播疾病的普遍原因之一.
- 准确和快速的诊断方法对于控制南印第安纳州的疫情至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新的一步识别方法,用于S. Indiana使用RPA与CRISPR/Cas12b结合.
- 评估S.Indiana检测所开发的试验的灵敏度,特异性和适用性.
主要方法:
- 建立了一个整合复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR/Cas12b的单平台.
- 确定了最佳反应条件,包括Cas12b和单导向RNA (sgRNA) 度.
- 用各种沙门氏菌菌株,其他病原体和尸样本验证了试验的性能.
主要成果:
- 在RPA-CRISPR/Cas12b试验中,每个反应的检测极限为14.4个副本.
- 在沙门氏菌菌株和其他病原体中,S. Indiana的识别被证明是100%的准确性.
- 测试显示,在不同加工阶段的尸样本上应用时,与传统培养方法100%一致.
结论:
- 开发的一步RPA-CRISPR/Cas12b测定是一种敏感,特定和准确的工具,用于S.Indiana检测.
- 这种方法为南印第安纳州感染提供了快速且无需仪器的诊断解决方案.
- 该测试具有改善食品安全和公共卫生监督的巨大潜力.
