双重液滴数字PCR试验用于食品中肝炎E病毒的量化
Gianfranco La Bella1, Maria Grazia Basanisi1, Gaia Nobili1
1Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della Basilicata, Via Manfredonia 20, 71121 Foggia, Italy.
Viruses
|March 28, 2024
概括
滴滴数字PCR (ddPCR) 提供了准确的肝炎E病毒 (HEV) 在食品中的量化. 这种新方法可以准确地检测猪组织和野猪肉中的HEVRNA,改善食品安全监督.
科学领域:
- 食品安全 食品安全
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 肝炎E病毒 (HEV) 是工业化国家新兴的食源性病原体.
- 定量实时RT-PCR (RT-qPCR) 用于HEV检测,但具有量化限制.
- 滴滴数字PCR (ddPCR) 提供了精确的核酸量化,没有标准曲线,并减少了抑制效应.
研究的目的:
- 使用ddPCR开发一种用于猪组织中HEV的绝对量化方法.
- 整合内部流程控制以进行回收评估.
- 评估 ddPCR 方法的性能,使用自然被 HEV 污染的野猪样本.
主要方法:
- 使用体外合成的HEVRNA和量化的dsDNA优化了ddPCR测定.
- 开发了一种双重ddPCR试验,用于HEV RNA绝对量化,并具有内部过程控制.
- 分析了天然受到HEV污染的野猪肌肉样本.
主要成果:
- 在ddPCR测定达到0.34基因组拷贝/μL的检测极限.
- 在分析野猪样本时,ddPCR方法证明了有效性.
- 双重ddPCR试验保持了与单个试验相比的效率.
结论:
- 开发的ddPCR试验提供了食品样本中HEV RNA的敏感和绝对量化.
- 试验包括内部流程控制,以可靠地评估回收.
- 这种方法通过改善HEV检测和量化来提高食品安全.
