开发一种平台方法,以快速检测和表征双特异抗体中特定域的翻译后修饰
Sophia Liu1, Jennifer B Nguyen1, Yimeng Zhao2
1Protein Biochemistry, Regeneron Pharmaceuticals, Inc., 777 Old Saw Mill River Road, Tarrytown, NY 10591, United States.
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
|March 28, 2024
概括
一种新的消化辅助成像毛细管异电聚焦 (DiCE) 方法准确量化了双特异抗体 (bsAbs) 中的电荷变异. 这种技术通过检测特定域的翻译后修改来确保治疗双特异抗体产品的质量.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 制药科学 制药科学
背景情况:
- 治疗性抗体,特别是双特异性抗体 (bsAbs),由于转化后修饰 (PTM) 和降解,表现出电荷异质性.
- 在bsAbs中特定域的PTM可以严重影响药物产品的稳定性,安全性和有效性.
- 准确地描述这些域特定修改对于确保bsAb质量至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证一种用于检测和量化治疗双特异性抗体中域特异性电荷变异的新方法.
- 解决传统方法在表征复杂的bsAb电荷配置文件时的局限性.
主要方法:
- 使用IdesS对双特异性抗体的酶性消化产生F(ab) 2和Fc片段.
- 在降低,变性条件下成像的毛细管异电聚焦 (icIEF),以分离光链和Fd域.
- 消化辅助成像毛细血管同电聚焦 (DiCE) 技术的开发.
主要成果:
- DiCE 方法在 bsAbs. 中检测和量化特定域的 PTM 方面表现出高灵敏度.
- 在bsAb CDR中,DiCE准确地测量了Lys98中的C端氨酸和特定位点的糖化,这些都无法通过完整的icIEF量化.
- 来自DiCE的量化结果与基映射可比,验证了其作为直角方法的准确性.
结论:
- DiCE 方法是一种有价值和敏感的直角技术,用于确保治疗双特异抗体产品的质量.
- DiCE 能够准确地描述影响 bsAb 功能和质量的特定领域电荷变异.
- DiCE 方法有可能用于分析其他复杂的生物物质,如融合蛋白和抗体-药物联合体.
