细胞内体分析的方法
Rosangela A S Eichler1, Luiz Felipe Martucci1, Leandro M de Castro2
1Department of Pharmacology, Biomedical Sciences Institute, University of São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|March 29, 2024
概括
提取细胞内需要快速失活降解酶. 将样品加热到80°C对大多数组织起作用,但血需要其他方法来防止凝血和保持的完整性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 细胞内是从蛋白质降解中产生的生物活性分子.
- 这些的高效提取对于它们的研究至关重要.
- 生物样本中的蛋白酶和酶可以快速降解.
研究的目的:
- 描述提取细胞内的有效方法.
- 为了应对在提取过程中降解的酶失活的挑战.
主要方法:
- 蛋白酶和酶的快速失活是必不可少的.
- 将生物源 (组织,细胞,液体) 在80°C温度下加热20分钟有效地使酶变质.
- 避免在高温下酸化,可以防止非特异性水解,特别是Asp-Pro键的水解.
主要成果:
- 对于大多数生物样本来说,在80°C的热失活是足够的.
- 由于高于55°C的热引起的凝血,等离子体样本需要使用其他酶非激活方法.
- 详细介绍了成功提取细胞内的具体协议.
结论:
- 有效的细胞内提取依赖于快速的酶失活.
- 样品类型决定了酶失活的适当方法.
- 描述的方法有助于恢复生物活性细胞内.


