一种基于CRISPR的异热侧流测定方法,用于检测Neisseria meningitidis
Dao Thi Huyen1, Julien Reboud2, Dao Thanh Quyen1,3
1Vietnamese - German Center for Medical Research (VG-CARE), 108 Military Central Hospital, Nr 1, Tran Hung Dao Street, Hai Ba Trung Dist., Hanoi, 10000, Vietnam.
Annals of clinical microbiology and antimicrobials
|March 30, 2024
概括
一种结合循环介导的同热核酸放大 (LAMP) 和CRISPR/Cas12a裂变的新型诊断试验可以快速准确地检测Neisseria meningitidis. 这种方法为诊断脑膜炎球菌病提供了一个敏感和特定的替代方案,改进了传统的培养方法.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断学
- 微生物学 微生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 脑膜炎Neisseria导致严重的脑膜炎和脑膜炎.
- 传统的微生物培养方法用于诊断是耗时的.
- 快速可靠的诊断工具对于及时干预至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证Neisseria meningitidis的快速诊断测定方法.
- 将循环介导的同热核酸放大 (LAMP) 与CRISPR/Cas12a裂变相结合.
- 为了实现对N. meningitidis的敏感和特定检测.
主要方法:
- 开发了六对LAMP原料对,针对N. meningitidis的保存ctrA基因.
- 用0.4M贝他因优化LAMP反应条件.
- 使用CRISPR/Cas12a切割用于信号放大和检测在侧流带上.
- 在怀疑脑膜炎球菌病患者的139个临床样本上评估了测试性能.
主要成果:
- 该LAMP测试显示,对其他细菌DNA的特异性为100%.
- 优化的LAMP-CRISPR/Cas试验检测到了N. meningitidis血清组B,C和W.
- 检测极限 (LOD) 是74个N. meningitidis副本.
- 与实时PCR相比,该试验在临床样本上显示了91%的灵敏度和99%的特异性.
结论:
- 开发的LAMP-CRISPR/Cas测定是一种可靠和快速的方法来诊断N. meningitidis.
- 这种分析可以作为现有的黄金标准诊断方法的宝贵补充.
- 优化的测定方法有助于及时诊断脑膜炎和脑膜炎炎.
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