链球菌 pyogenes Cas9 核核蛋白传递,用于有效,快速和无标记物基因编辑Trypanosoma 和Leishmania

科学领域:

• 寄生虫学的寄生虫学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 基内托塑类动物是单细胞真核寄生虫,负责人类和动物的重大疾病,包括非洲睡眠病,查加斯病和莱什曼病.
• 对这些寄生虫的有效研究需要强大的基因组操纵方法来了解它们的生物学.
• 目前的基因组编辑技术可能是复杂和耗时的.

研究的目的:

• 建立一个快速高效的基因组编辑系统,用于kinetoplastids.
• 为了证明使用核糖核蛋白复合体用于各种类型的kinetoplastid物种基因修饰的可行性.
• 提供一种无标记物基因操纵工具,用于研究三虫.

主要方法:

• 核糖核蛋白复合体的转化,包括Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9) 和指导RNA,转化为基内托塑.
• 该方法用于Trypanosoma brucei,Trypanosoma congolense和Leishmania promastigotes的基因失活,删除和突变.
• 通过克隆和PCR查进行验证,绕过等离子体结构和抗生素选择.

主要成果:

• 在无标记物条件下,在tripanosomatids中实现了快速有效的基因修饰.
• 在不同的生命周期阶段和物种中成功地禁用,删除和突变候选基因.
• 证明了SpCas9核糖蛋白转染方法对野生类型寄生虫的适应性.

结论:

• SpCas9核核蛋白复合体转染是一种强大而通用的工具,用于基因组编辑在kinetoplastids.
• 这种方法显著加速了对Trypanosoma和Leishmania等寄生虫的遗传研究.
• 没有标记物的方法简化了实验工作流程,使得基因组编辑更容易获得研究人员.