在猪胚胎中使用重组腺相关病毒进行单步in vivo基因淘汰

科学领域:

• * 动物生物技术和基因工程.
• *开发新的基因编辑传递系统.

背景情况:

• * 基因编辑猪是人类疾病研究,基因疗法和异种移植的关键模型.
• * 传统的CRISPR/Cas9对猪胚胎的输送是复杂的,昂贵的,耗时的,需要专门的微操作.
• * 有效和简化的基因编辑猪生产方法非常受欢迎.

研究的目的:

• * 开发和验证一种创新的一步方法,用于生产转基因猪.
• *利用复合腺相关病毒 (rAAV) 进行CRISPR/Cas9传递到植入前的猪胚胎中.
• *为生产基因编辑猪建立一个成本效益和简化的方法.

主要方法:

• *对rAAV血清型 (rAAV-1, -6, -8, -9) 的查,以使用EGFP表达来有效向猪胚胎.
• *将针对GHR基因的sgRNA包装成自我补充的AAV (scAAV) 和Cas9蛋白质变成单链AAV (ssAAV).
• *在受孕后24小时内向母猪注射RAAV-CRISPR/Cas9组件,然后进行体外验证.

主要成果:

• * 已证实使用rAAV6.6在体内和体内向猪肉囊中有效地输送CRISPR/Cas9组件.
• *通过卵管内注射rAAV-CRISPR/Cas9.9,成功在猪中进行基因编辑.
• * 验证了对猪的一步rAAV介导基因编辑方法的可行性.

结论:

• * 开发的使用rAAV-CRISPR/Cas9的一步卵巢注射方法对产生基因编辑猪有效.
• * 这种新的方法绕过了复杂的体外胚胎操纵和胚胎移植程序.
• *该方法为生产转基因猪提供了一个简单,经济有效和高效的策略.